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A549 [A-549]
A549 [A-549]
規(guī)格:
貨期:
編號(hào):MZ-0015
品牌:Mingzhoubio

活化細(xì)胞
凍存細(xì)胞
熒光標(biāo)記細(xì)胞

規(guī)格:
T25瓶
凍存管

產(chǎn)品名稱(chēng) A549 [A-549]
商品貨號(hào) MZ-0015
中文名稱(chēng) 人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞
細(xì)胞數(shù)量 1*10^6
組織來(lái)源 肺腺癌;男性
細(xì)胞種屬 Homo sapiens, human
細(xì)胞污染 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)陰性。
生長(zhǎng)特性 adherent
培養(yǎng)基 Ham's F-12K+10% FBS+1% P/S
形態(tài)特征 epithelial
傳代方法 1:3-1:6
培養(yǎng)條件 Atmosphere: Air, 95%; CO2, 5%。Temperature: 37℃
細(xì)胞描述 該細(xì)胞系是1972年由GiardDJ通過(guò)肺癌組織移植培養(yǎng)建系的,源自一位58歲的白人男性。A549能通過(guò)胞苷二磷脂酰膽堿途徑合成富含不飽和脂肪酸的卵磷脂;角蛋白陽(yáng)性。
細(xì)胞傳代步驟 如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中
復(fù)蘇細(xì)胞步驟 將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
細(xì)胞凍存步驟 :待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例;1.細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入2ml完全培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
細(xì)胞凍存 Freeze medium: 50% basal medium+40% FBS+10%.DMSOStorage temperature: liquid nitrogen vapor phase
細(xì)胞運(yùn)輸 干冰運(yùn)輸(2ml凍存管)或活細(xì)胞運(yùn)輸(T25細(xì)胞瓶)
姓名 手機(jī)號(hào)(微信同號(hào)) QQ
梅經(jīng)理 17280875617 1438578920
胡經(jīng)理 13345964880 2438244627
周經(jīng)理 17757487661 1296385441
于經(jīng)理 18067160830 2088210172
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