原理
微生物具有容易變異的特性,因此,在保藏過程中,必須使微生物的代謝處于最不活躍或相對靜止的狀態(tài),才能在一定的時間內(nèi)使其不發(fā)生變異而又保持生活能力。
選用優(yōu)良菌株,根據(jù)生理生化特征隔絕空氣使其處于休眠狀態(tài)或者代謝處于最低的狀態(tài),生長繁殖受抑制從而降低變異率。
細菌、酵母菌、絲狀真菌均可用此法保藏,前兩者可保藏2年左右,有些絲狀真菌甚至可保藏14-17年之久。此法較液氮、冷凍干燥法簡便,不需要特殊設(shè)備。
材料與儀器
細菌 酵母菌 放線菌 霉菌 肉膏蛋白胨斜面培養(yǎng)基 滅菌水 滅菌脫脂牛乳 五氧化二磷 濾紙 安瓿管 棉塞 滅菌鍋 培養(yǎng)皿 試管 鑷子 干燥器 溫箱 酒精燈 冰箱 真空泵 真空壓力表
步驟
一、將濾紙剪成0.5×1.2 cm的小條,裝入0.6×8 cm的安瓿管中,每管1-2張,塞以棉塞,1.05 kg/cm2,121.3℃滅菌30分鐘。
二、將需要保存的菌種,在適宜的斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng),使充分生長。
三、取滅菌脫脂牛乳1-2 ml滴加在滅菌培養(yǎng)皿或試管內(nèi),取數(shù)環(huán)菌苔在牛乳內(nèi)混勻,制成濃懸液。
四、用滅菌鑷子自安瓿管取濾紙條浸入菌懸液內(nèi),使其吸飽,再放回至安瓿管中,塞上棉塞。
五、將安瓿管放入內(nèi)有五氧化二磷作吸水劑的干燥器中,用真空泵抽氣至干。
六、將棉花塞入管內(nèi),用火焰熔封,保存于低溫下。
七、需要使用菌種,復(fù)活培養(yǎng)時,可將安瓿管口在火焰上燒熱,滴一滴冷水在燒熱的部位,使玻璃破裂,再用鑷子敲掉口端的玻璃,待安瓿管開啟后,取出濾紙,放入液體培養(yǎng)基內(nèi),置溫箱中培養(yǎng)。